ICS 65.020.30 B 44 GP 中华人民共和国国家标准 GB/T 18448.4—2001 代替GB/T14926.36—1994 实验动物 卡氏肺孢子虫检测方法 Laboratory animalMethod for examination of Pneumocystis carinii 2002-05-01实施 2001-08-29发布 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 GB/T 18448.4—200T 前言 本标准由GB/T14926.36-1994《实验动物 卡氏肺孢子虫检验方法》修订而成。 本标谁增加了实验动物处死前的麻醉。将原标中“腹部消毒”改为“胸部消毒”，删除“暴露胸腔内 容物"。 本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口。 本标准起草单位：中国实验动物学会。 本标准主要起草人：李冠民、诸欣平、潘振业、刘兆铭。 本标准于1994 年1 月首次发布。 中华人民共和国国家标准 GB/T 18448.4—2001 实验动物 卡氏肺孢子虫检测方法 代替GB/T14926.36—1994 Laboratory animal-Method for examination of Pneumacystis carinti 1范围 本标谁规定了实验动物的卡氏肺孢子虫的检测方法和结果判定,并描述了其形态特征。 本标准适用于小鼠、大鼠、地鼠等实验动物的卡氏肺孢子虫的检测。 2原理 主要寄生于肺细胞内（或释放于细胞外)的卡氏肺孢子虫经固定、染色，可真接在显微镜下观察。 3材料和试剂 3.1显微镜。 3.2载玻片。 3.3姬姆萨稀释液。 4检测步骤 4.1取样 麻醉处死动物，胸部消毒，切开胸腔，取出肺脏，用生理盐水冲洗。用手术刀切开肺脏的各叶，分别涂 压在同一载玻片上，自然干燥。 4.2固定和染色 将自然干燥后的肺印片,用甲醇固定 5 min,然后自来水冲洗,自然干燥。用姬姆萨稀释液染色 15 min~～20 min，自水冲洗，干燥待检。 5结果判定 经染色后的肺印片，油镜检查。此方法可检查出卡氏肺孢子虫的包囊和滋养体。在显微镜下检查到 包囊或滋养体皆为阳性。 包囊为圆形或卵圆形,直径 4 μm～8 μm,平均 5.5 μm,内含一些细胞质,残余线粒体和新月形囊内 小体，数目2～8个，成熟包囊含8个囊内小体，呈半月形。姬姆萨染色细胞质呈浅蓝色，细胞核呈深紫 色，囊壁不着色。 滋养体大小为 1.2 μm~5.( μm。单核,有一个核仁,胞质中还有一些糖原颗粒与脂肪粒, 6结果报告 根据结果判定，作出报货。 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2001-08-29批准 2002-05-01 实施