ICS 65.020.20 CCS B 05 34 安 徽 省 地 方 标 准 DB34/T 4111—2022 香椿组培技术规程 Technical regulations for tissue culture of Toona sinensis 2022-03-29 发布 2022-04-29 实施 安徽省市场监督管理局 发 布 DB34/T 4111—2022 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由阜阳师范大学提出。 本文件由安徽省林业局归口。 本文件起草单位：阜阳师范大学、阜阳市迪欣农业种植有限公司、亳州市金辉园林农业科技工程有 限公司、安徽农之源生态农业有限公司、中国科学院亚热带农业生态研究所、安徽田园居电子商务股份 有限公司、阜阳市绿景现代农业科技有限公司、阜阳职业技术学院、阜阳市农业科学院、安徽粮食工程 职业学院、合肥市包河区绿化管理处。 本文件主要起草人：兰伟、郑萍、凌飞东、彭亮、曹川、李素梅、侯金艳、胡新、孔祥峰、贾云露、 李辉、张源、龚雪梅、徐永、王先亮、杨光硕、张顺。 I DB34/T 4111—2022 香椿组培技术规程 1 范围 本文件规定了香椿（Toona sinensis）组培的组培设施、培养基配制、诱导培养、继代增殖培养、生 根培养、炼苗、组培苗清洗和移栽、档案管理。 本文件适用于香椿组培苗培育。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 NY/T 2306 花卉种苗组培快繁技术规程 LY/T 2289 林木种苗生产经营档案 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 组培设施 按照 NY/T 2306 的规定执行。 5 培养基配制 5.1 培养基类型的选择 选择 MS培养基为基本培养基。 5.2 MS 培养基配制 按照 NY/T 2306 的规定执行。 5.3 培养基配方 5.3.1 诱导培养基 3/4 MS＋6-BA(6-苄氨基嘌呤) 2.0 mg/L + 蔗糖 20 g/L+卡拉胶 5.5 g/L。 5.3.2 继代增殖培养基 1 DB34/T 4111—2022 3/4 MS＋6-BA 0.5 mg/L+ KT（6-糠基氨基嘌呤）0.2 mg/L+ IBA（吲哚丁酸）0.2 mg/L ＋GA3 （赤 霉素）1.0 mg/L＋白砂糖 20 g/L +卡拉胶 5.5 g/L。 5.3.3 生根培养基 1/2 MS＋6-BA 0.2 mg/L＋IAA（吲哚乙酸） 2.0 mg/L＋IBA 2.0 mg/L +AC（活性炭）0.2 g/L+ 白 砂糖 20 g/L +卡拉胶 5.5 g/L。 5.4 培养基 pH 值 用 1mol/L HCl或 1mol/L NaOH 调节培养基 pH 值至 5.8。 5.5 培养基分装 每个培养瓶分装 30 ml～40 ml。分装时培养基不得沾在培养瓶口周围。 5.6 灭菌 5.6.1 培养基灭菌 2 配制的培养基应于 12 h 内在高压灭菌锅中进行灭菌。在 1.1 kg/cm 、121℃条件下，灭菌 15 min～ 20 min，待压力降至 0 时，尽快取出存放在接种室固定位置，不得与未灭菌物品混放。 5.6.2 接种工具灭菌 2 将剪刀、镊子等接种工具放置在高压灭菌锅中，高压灭菌锅中在 1.1 kg/cm 、121℃条件下，灭菌 15 min～20 min，待压力降至 0 时，放置在超净工作台上。 5.6.3 超净工作台灭菌 将灭菌的培养基和接种工具放置在超净工作台上，接通电源，打开超净工作台上的紫外灯灭菌 25 min～30 min，启动风机，关闭紫外灯。接种前，工作台面用 70％乙醇擦拭一遍。 6 诱导培养 6.1 外植体选取 3～4月份，在生长健壮、无病虫害的香椿植株上，选取长 2.0 cm～3.0 cm 茎尖为外植体备用。 6.2 外植体清洗 将选取的外植体在自来水下流水冲洗 15 min～20 min。 6.3 外植体消毒 在超净工作台上，用无菌滤纸吸干外植体表面水分，浸入 75％乙醇中消毒 25 s～30 s 后，将 75％ 乙醇倒去，用无菌水冲洗 3 次后，浸入 2.0％次氯酸钠溶液消毒 15 min～20 min，倒出次氯酸钠溶液 后，再用无菌水冲洗 4～5 次，置于无菌接种盘（内置无菌滤纸）上备用。 6.4 2 外植体接种 DB34/T 4111—2022 6.4.1 接种工具消毒 接种时，接种工具剪刀、手术刀和镊子等用电热灭菌器或酒精火焰消毒后，冷却至室温备用。 6.4.2 外植体处理 将已消毒的外植体切除下端部分及上端幼叶，留取长 1.0 cm～1.5 cm 的茎尖，切成长 0.5 cm 茎 段备用。 6.4.3 接种 将已处理好的外植体接种在诱导培养基上。每瓶培养基接种 2～3 个茎段。 6.4.4 标记 接种后，每批用记号笔将品种代号、培养基编号、工作人员编号及接种日期等信息标示在培养瓶上。 6.5 培养条件 培养温度为 24℃～26℃，光照强度 2000 lx～3000 lx，连续定时光照时间 12 h/d。 6.6 培养时间 培养 25 d～30 d。 7 7.1 继代增殖培养 转接 将生长健壮的无菌香椿幼苗切成含有 1～2 个节间，长 1.0 cm～1.5 cm 的小段，转接至继代增殖 培养基上培养。 7.2 培养条件 同 6.5。 7.3 培养时间 培养 45 d ～50 d。 7.4 培养代数 继代增殖次数控制在 15 代以内。 8 8.1 生根培养 转接 选取生长健壮、长势一致，含有 1～2 个节间，苗高 2.0 cm～3.0 cm 的组培苗，转接到生根培养 基中。 3 DB34/T 4111—2022 8.2 培养条件 同 6.5。 8.3 培养时间 同 7.3。 9 炼苗 9.1 瓶苗要求 培养瓶内组培苗长出 2～3 条 0.3 cm～3 cm 不定根，展开叶 3～4 片，高达 3.0 cm 以上时，便 可炼苗移栽。 9.2 炼苗条件 培养瓶放置在遮光率为 70％～75％，相对湿度为 70％～90％，温度为 24℃～26℃的温室中，打 开或半打开培养瓶盖炼苗。 9.3 炼苗时间 炼苗 3 d～5 d。 10 组培苗清洗和移栽 用自来水将炼苗后的组培苗基部的培养基冲洗干净后，移栽至已灭菌的基质中。 11 档案管理 参照 LY/T 2289 的规定执行。 4