ICS 65.020.01 B 15 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3629—2020 马铃薯黑胫病菌和软腐病菌 PCR检测方法 Detection of pathgenic bactera for potato blackleg and soft rot byPCR method 行业标准信息服务平台 2020-11-01实施 2020-07-27发布 中华人民共和国农业农村部 发布 NY/T 3629—2020 前 本标准由农业农村部种植业管理司提出并归口。 部脱毒马铃薯种薯质量监督检验测试中心（哈尔滨）、中国农业大学、西南大学。 本标准主要起草人：魏琪、胡林双、董学志、白艳菊、吕典秋、王晓丹、彭亚清、闵凡祥、宿飞飞、范国权、 杨帅、王文重、郭梅、王绍鹏、刘振宇、高云飞、张抒、万书明、刘尚武、张威、邱彩玲、高艳玲。 行业标准信息服务平台 I NY/T 3629—2020 马铃薯黑胫病菌和软腐病菌PCR检测方法 1范围 本标准规定了马铃薯黑胫病菌和软腐病菌的PCR检测方法，其致病菌株主要包括黑腐果胶杆菌 （Pectobacteriumatrosepticum，Pa）、胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种（P.carotouorumsubsp.carotouo- rum，Pcc）和菊迪克氏菌（DickeyachrysanthemtDch）3种。 本标准适用于马铃薯试管苗、原原种和田间马铃薯植株、块茎等组织中马铃薯黑胫病菌和软腐病菌的检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必尺可少的 G 实验室用水规格和武验 GB/T6682 分析实 RE 3原理 建区域在进化上较为保守， 胫病和软 大腐病的致病南基因组包含4500个基因：某些关 其原理是：马铃薯黑 一性，利用致病菌相应的特异性引物，以基因组DN 为模板 异性和唯 Taq DNA聚 可代表该病原菌特 POP扩 增，根据PCR扩增结果判断该样品中是否合有目的片 而达到鉴定马铃薯 合酶的作用下进行 CH 黑胫病菌及软腐病 菌的月 4试剂与材料 除男有# 6682 级水。 以下所有试剂， 合GB 4.1植物基因组 NA提取试 4.2 Taq DNA 4.3dNTP混合物 4.410XPCR缓冲 4.5 无水乙醇。 4.6 50XTAE电泳缓冲液 4. 7 1×TAE电泳缓冲液 量取50XTAE电泳缓冲液20ml，加水定容至1000ml 4.875%乙醇 M 量取无水乙醇75mL，加水定容至100mL。 4.9溴化乙锭溶液（10mg/mL）或GelRed核酸凝胶染料（溴化乙锭替代物） 称取溴化乙锭200mg，加水溶解，定容至20mL。 GelRed核酸凝胶染料按照商品推荐稀释浓度使用。 4..10 01.0%琼脂糖凝胶板 称取琼脂糖1.0g，加入1XTAE电泳缓冲液定容至100mL，微波炉中加热至琼脂糖融化，待溶液冷 却至50℃～60℃时，加溴化乙锭溶液或GelRed核酸凝胶染料5uL，摇匀，倒人制胶板中均匀铺板，凝固后 取下梳子，备用。 4.11引物缓冲液 用水将上、下游引物分别配制成工作浓度为10ng/μL的溶液。 1