ICS 11. 220 NY B 41 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 684—2003 犬瘟热诊断技术 Diagnostic techniques for canine distemper 行业标准信息服务平台 2003-07-30发布 2003-10-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T 684--2003 前 言 本标准的附录 A为规范性附录。 本标准由农业部畜牧兽医局提出并归口。 本标准起草单位：农业部兽医诊断中心。 本标准主要起草人：田克恭、王宏伟、遇秀玲、陈西钊、王传彬。 行业标准信息服务平 NY/T 684--2003 犬瘟热诊断技术 1 范围 本标准规定了犬瘟热(CD)的临床诊断、犬瘟热病毒(CDV)的分离与鉴定、免疫酶试验和免疫酶组 织化学方法等诊断技术 本标准适用于犬瘟热的诊断。 2临床诊断要点 2.1 临床症状 CD的临床表现多种多样，与CDV的毒力，环境条件，宿主的年龄、品种及免疫状态有关。病犬体 温升高至40℃以上，鼻流清涕至脓性鼻汁，脓性眼屎，有咳嗽、呼吸急促等肺炎症状，腹下可见米粒大丘 疹。病程长的犬足枕角质层增生。病后期CDV侵害大脑时则出现神经症状，头、颈、四肢抽搐。 2.2病理变化 CDV为泛嗜性病毒,对上皮细胞有特殊的亲和力,因此病变分布非常广泛。新生幼犬感染 CDV通 常表现胸腺萎缩。成年犬多表现结膜炎、鼻炎、气管支气管炎和卡他性肠炎。表现神经症状的犬通常可 见鼻和脚垫的皮肤角化病。中枢神经系统的大体病变包括脑膜充血，脑室扩张和因脑水肿所致的脑脊 液增加。 CDV的包涵体通常呈嗜酸性，位于胞浆内,直径1 μm～5 μm，可在粘膜上皮细胞、网状细胞、白细 胞、神经胶质细胞和神经元中发现。核内包涵体多位于被覆上皮细胞、腺上皮细胞和神经节细胞。 3病毒分离与鉴定 3.1材料准备 3. 1.1 试剂 3.1.1.1改良最低要素营养液（DMEM)培养基，配方见第A.1章。 3.1.1.2非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)。 3.1.1.3标准阳性血清：CDV单克隆抗体，中和抗体效价1：1024。 3.1.1.4标准阴性血清：无CDV感染的犬血清。 3.1.1.5新生牛血清处理：用无血清DMEM洗涤细胞两次，加人培养液二分之一量的新生牛血清， 37℃吸附1h。吸附后的新生牛血清分装，置一20℃备用。 3.1.1.6青霉素、链霉素。 行业标准信息服务平 3.1.2器材 细胞培养瓶； b) 吸管； c) 二氧化碳培养箱； (P 37℃恒温水浴箱； e) 普通冰箱及低温冰箱； f) 离心机及离心管； 研磨器械; g) h) 普通光学显微镜； 1