ICS 65.020.20 B 05 黑 DB23 龙 江 省 地 方 标 准 DB23/T 2683—2020 水稻回交转育技术操作规程 2020-09-11 发布 黑龙江省市场监督管理局 2020-10-10 实施 发 布 DB23/T 2683-2020 前 言 本标准依据GB/T 1.1-2009编写规则起草。 本标准由黑龙江省农业农村厅提出。 本标准由黑龙江省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：黑龙江省农业科学院耕作栽培研究所、中国科学院遗传与发育生物学研究所。 本标准主要起草人：来永才、朱祯、孟英、王锋、唐傲、张磊、张喜娟、李平、陈在杰、董文军、 刘猷红、陈丽华、王立志、姜树坤、刘凯、刘琦、姜辉、任洋、董德建。 I DB23/T 2683-2020 水稻回交转育技术操作规程 1 范围 本标准规定了水稻回交转育技术的术语和定义、亲本选择、杂交方法、回交转育及生产档案。 本标准适用于水稻回交转育。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 8321（所有部分） 农药合理使用准则 GB/T 17316 水稻原种生产技术操作规程 NY/T 496 肥料合理使用准则 通则 NY/T 1276 农药安全使用规范 总则 NY/T 1433 水稻品种鉴定技术规程 SSR标记法 DB23/T 1671.3 亿亩生态高产标准农田 水稻生产技术规程 DB23/T 1929 常规水稻品种纯度检测SSR方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 轮回亲本 用于多次回交的亲本，是目标性状的接受者，又称受体亲本。 3.2 非轮回亲本 只在第一次杂交时应用的亲本，是目标性状的提供者，又称供体亲本。 3.3 回交转育 两亲本杂交后，其杂交后代再与亲本之一进行连续多次的回交，通过对回交后代的选择把亲本的目 标性状导入另一亲本的育种方法。 3.4 分子标记选择 利用与目标性状基因紧密连锁或表现共分离关系的分子标记，在分离群体中对个体基因型进行选择。 4 亲本选择 4.1 轮回亲本选择 选择产量高、综合性状较好，经改良后仍有前途的品种。 4.2 非轮回亲本选择 1 DB23/T 2683-2020 应具备轮回亲本所不具备的目标性状，该性状遗传力强，单基因控制或少数主效基因控制的为佳， 其他性状无严重缺陷。 5 杂交方法 5.1 亲本开花期的调节 根据不同亲本的生育期，通过调整播期或遮光等方式，使杂交亲本的花期相遇。 5.2 去雄 在杂交母本里选择稻穗并剪除上部已开花的穗粒和最下端的穗粒，留中间部位的10个～20个穗粒， 每个穗粒剪去外颖上端的三分之一，去除6个花药，待所留穗粒全部去雄完毕后套袋。 5.3 授粉 去雄的母本稻穗，应在当日或次日进行人工授粉。当父本稻穗进入开花期时，取下正开花的父本稻 穗，将花粉抖撒入授粉袋内。授粉完毕后，挂牌写明亲本名称、授粉日期。 5.4 收获 杂交籽粒成熟后，应及时按组合单独脱粒收获，统计数量后填写记录并保存。即得到杂种一代种子。 6 回交转育 6.1 基本程序 6.1.1 技术流程 回交转育的技术流程可参考附录A。 6.1.2 连续回交 在杂种一代和每次回交后代中根据分子标记选择具有目标性状基因且背景恢复率高的个体与轮回 亲本回交。回交的同时记录每一世代目标性状的遗传分离情况，以确认目标性状的遗传效应。 6.1.3 自交纯化 在回交到适宜世代后，还需自交2代～3代，使回交后代的目标性状从杂合状态通过自交纯化，获得 性状稳定的株系。稳定株系与轮回亲本遗传背景的相似度可根据 NY/T 1433 提供的方法进行分子鉴定。 6.2 回交次数和群体规模 6.2.1 回交次数原则 回交次数以轮回亲本的特征特性基本得到恢复为准。亲本间差异小时，回交次数可少些，若目标性 状基因与不良基因连锁，应增加回交次数。 回交群体中轮回亲本的基因恢复频率 P1 和从轮回亲本导入基因的纯合体比率 P2，可根据式（1）和 式（2）计算： 式中： P1——轮回亲本的基因恢复频率； = − t × 00%……………………………………… 2 DB23/T 2683-2020 n——回交次数。 式中： P2——从轮回亲本导入基因的纯合体比率； = − × 00%……………………………………... n——回交次数； r——为杂种的杂合基因对数。 6.2.2 回交群体的规模 为保证回交的植株带有需要转移的目标性状基因，每一回交世代必须种植足够的株数，可根据式 3 计算： log − ≥ ………………………………………………… 3 log − 式中： m——所需种植数量； α——为几率水准； p——在杂种群体中合符需要的基因型期望比率。 6.3 回交后代的鉴定与选择 6.3.1 选择原则 在回交后代中，选择具有目标性状且农艺性状与轮回亲本尽可能相似的单株进行回交。 6.3.2 农艺性状特征 轮回亲本和回交后代的主要农艺性状特征田间记载项目参考GB/T 17316执行，并按所记录的内容进 行对比鉴定。 6.3.3 回交后代的分子标记选择 6.3.3.1 基本要求 需已知控制目标性状的基因或与之紧密连锁的标记，且分型标记来自于该基因内部或与之紧密连锁 的侧翼标记。 6.3.3.2 基因或标记位点来源 宜选择公开文献中报道的，或已公开并获使用许可的专利；也可是前期研究获得的目标性状的基因 或标记。 6.3.3.3 DNA 提取、扩增和产物检测 按照DB23/T 1929提供的方法进行。 6.3.3.4 选择方法 根据回交后代群体目标性状的基因分型结果，保留携带目标性状基因及遗传背景恢复率高的单株用 于下一世代的回交或自交。 6.4 材料种植和田间管理 3 DB23/T 2683-2020 亲本和回交后代材料采取单株种植，群体种植的数量根据本文件中6.2.2所列公式和田间实际条件 计算，育苗和田间管理参照DB23/T 1671.3执行，肥料使用应符合NY/T 496的规定，农药使用应符合GB/T 8321、NY/T 1276的规定。 7 生产档案 应建立生产档案，内容包括：亲本信息、回交世代材料信息、鉴定选择结果、种植时间、种植数量、 杂交时间、杂交粒数量、田间管理详情和收获期等。 4 DB23/T 2683-2020 附 录 A （资料性附录） 回交转育的技术流程 A.1 回交转育技术流程见图 A.1。 图A.1 回交转育的技术流程图 5