ICS 67.080.20 B 31 DB14 山 西 省 地 方 标 准 DB 14/ T 1774—2019 斜面菌种培育桑蚕蛹虫草技术规程 2019 - 06 - 25 发布 山西省市场监督管理局 2019 - 08 - 25 实施 发 布 DB14/ T 1774—2019 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 术语和定义 ........................................................................ 1 4 设施和用具 ........................................................................ 1 5 人员要求 .......................................................................... 2 6 菌液制备 .......................................................................... 2 7 蚕蛹选择与准备 .................................................................... 2 8 蚕蛹接种 .......................................................................... 2 9 接种后管理 ........................................................................ 2 10 采收 ............................................................................. 3 11 烘干和包装 ....................................................................... 3 I DB14/ T 1774—2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由山西省农业农村厅提出并监督实施。 本标准由山西省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：山西省蚕业科学研究院。 本标准主要起草人：卢建珍、韩红发、王玉珏、王建伟、刘有志、韩淑鸿、张超虹、杜利梅、黄凡 哲、沈琦、李淑芳、景雅兰、靳月琴、韩敏、张娟、毛铃哲。 II DB14/ T 1774—2019 斜面菌种培育桑蚕蛹虫草技术规程 1 范围 本标准规定了斜面菌种培育桑蚕蛹虫草培育技术的设施和用具、人员要求、菌液制备、蚕蛹选择与 准备、蚕蛹接种、接种后管理、采收、烘干和分级包装。 本标准适用于斜面菌种培育桑蚕人工蛹虫草。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 12728 食用菌术语 NY/T 528 食用菌菌种生产技术规程 NY/T 5010 无公害农产品 种植业产地环境条件 NY/T 2798.5 无公害农产品 生产质量安全控制技术规范 第5部分：食用菌 中华人民共和国食品安全法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 桑蚕蛹虫草 桑蚕蛹虫草是蛹虫草中的一种，是人工将虫草菌种接种到鲜活桑蚕蛹体内培育而成。 4 设施和用具 4.1 设施 应选择生态环境良好、无污染的生产区域，培养设施干净、整洁、无杂菌污染。桑蚕蛹虫草的设施 及洁净程度应符合NY/T 5010和NY/T 2798.5的规定。 4.2 接种针 蚕蛹接种针使用注射量程为5μL～10μL的尖头微量移液器。 4.3 培养器具 接种后存放蚕蛹及后期进行菌丝培育和子实体培养的器具。 1 DB14/ T 1774—2019 5 人员要求 5.1 接种前工作人员应经过专业技术培训。 5.2 工作人员应配备专用、提前消毒的工作服。 5.3 接种前，工作人员应用酒精消毒双手，佩戴口罩。 6 菌液制备 6.1 菌种 选用抗逆性强、出草快的优良菌株。 6.2 PDA 培养基制备 取去掉外皮的小块土豆200 g，加水煮25 min，过滤后取澄清液加水至1 000 mL，依次放入琼脂20 g、 磷酸二氢钾2 g、硫酸镁1 g、葡萄糖20 g、蛋白胨3 g、VB10.05 g、柠檬酸三铵1 g，充分搅拌，溶化后 装入1.8 cm ×18 cm试管，装管量约1/5～1/4（10 mL）处，加盖棉塞，高压121℃灭菌30 min，趁培养 基还是液体状态时，摆成斜面凝固后制成斜面培养基，用于菌种活化和母种扩繁。 6.3 菌种活化和扩繁 母种在无菌条件下接入斜面培养基，在23 ℃恒温培养箱中避光培养，待菌丝布满整个培养基表面 后给以散射光光照，直至菌丝呈现淡黄色，保存备用。 6.4 菌种液制作 无菌条件下，用无菌铲刮下经扩繁后的1支试管菌种斜面上的菌苔，放入研磨钵内，加无菌生理水 或无菌水10 mL均匀研磨，直至研磨钵内菌丝分布均匀，液体混浊，制备成菌悬液。 7 蚕蛹选择与准备 7.1 选择 25 ℃保护，上簇后 7 d 左右、大小均匀的健康桑蚕蛹。 7.2 接种前用 75%的食用酒精均匀喷洒蛹体，保持蛹体体表湿润，均匀消毒后，用无菌水清洗蛹体， 在超净工作台内晾干。 8 蚕蛹接种 无菌条件下用10μL微量移液器吸取6μL～7μL接种液，在蛹腹面倒数第二腹节间膜处，用尖头微 量移液器平行扎入蛹体注射，针头旋转拔出，接种后的蚕蛹消毒后单层摆放平铺于培养器中，封口膜封 口，送入培养室。 9 接种后管理 9.1 发菌培养期 9.1.1 温度 2 DB14/ T 1774—2019 前期温度18 ℃，蛹体变硬出现白色绒毛状菌丝时室温保持22 ℃～23 ℃继续培养1～2 d。 9.1.2 湿度 室内湿度保持在65%～70%左右。 9.1.3 光线 保持黑暗，蚕蛹感染菌液7～10 d后硬化，13 d左右在蚕蛹体侧气门处出现白色菌丝。 9.2 转色培养期 每天感光12 h左右，白天自然光，阴天或傍晚补充日光灯照射，光照强度100 lex～200 lex，晚上 保持黑暗；白天室内温度保持在21 ℃～23 ℃，夜晚15 ℃～16 ℃；室内相对湿度75%；3 d后菌丝变成 淡黄色，7～10 d后，蛹体表面菌丝体变成桔黄色，并且菌蕾原基显现。 9.3 出草管理期 9.3.1 温度 温度控制在20 ℃～23 ℃。 9.3.2 湿度 室内相对湿度80%～85%。 9.3.3 光照 光照时间12 h/d，光照强度200lex。子实体形成后及时调整培养瓶与光的方向。 9.3.4 氧气 封口膜上扎孔给子实体补充氧气,培养10 d左右子实体达到3 cm，每天开窗换气2次，每次30 min。 10 采收 子实体培养至40 d左右，长至5 cm～8 cm，子实体头部膨大，表面有许多黄色粉状的子囊孢子出现， 颜色呈桔黄色时培养成熟，连同蚕蛹一起取出，保留子实体形状完好无损。 11 烘干和包装 采收后避免阳光直射，在通风阴凉处自然晾干，或用40 ℃以下低温烘干至蛹虫草的含水量在10% 以下即可包装。 _________________________________ 3