ICS 65.020.30 B 43 备案号：55162-2017 青 海 DB 63 省 地 方 标 准 DB63/T 1591—2017 藏獒细管冷冻精液 2017 - 06 - 20 发布 青海省质量技术监督局 2017 - 09 - 20 实施 发 布 DB63/T 1591—2017 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由青海省农牧厅归口。 本标准起草单位：青海省家畜改良中心。 本标准主要起草人：薛晓蓉、杨桂梅、胡宁玺、谭建宁、刘宁、郭占泽、马元梅、常永梅、赵静、 李强、莫延新、谢秀梅、池胜刚、袁海洲、赵小娟。 I DB63/T 1591—2017 藏獒细管冷冻精液 1 范围 本标准规定了藏獒细管冷冻精液的质量要求、检验方法、判定规则。 本标准适用于藏獒的细管冷冻精液产品的检验和判定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 DB63/T 1435-2015 藏獒细管冷冻精液生产技术规程 3 质量要求 3.1 细管外观 细管无裂痕，两端封口严密，细管标识清楚，细管标识应符合DB63/T 1435-2015中6.4.1.3的规定。 3.2 剂型及剂量 0.25毫升细管剂型，每剂剂量≥0.18毫升。 3.3 每剂量解冻后 3.3.1 3.3.2 3.3.3 4 4.1 精子活力≥35%。 前进运动精子数≥2000 万个。 细菌数≤800 个。 检验分类、项目及判定规则 检验分类 分为常规检验和型式检验。常规检验是对冻精的单项目检验，主要是在生产批入库前和销出站时的 检验。型式检验是对冻精全部项目检验，评定产品质量应全面符合标准，也是在生产方抽样检验、仲裁 和质量监督抽样检验时选定项的检验。 4.2 检验项目及判定规则 常规检验项目为细管外观和精子活力。型式检验项目为本标准中3的内容。样品中任何一项目检验 未达到标准中要求的规定，则判为不合格。 5 检验方法 1 DB63/T 1591—2017 5.1 细管外观 用目测法检查细管外观，其结果符合3.1的规定。 5.2 细管剂量检查 5.2.1 主要器材 小试管、剪刀、1.0毫升吸管。 5.2.2 检查方法 取三支细管冻精自然解冻后剪去两端，把精液倒入一小试管内，用1.0 毫升吸管准确吸取精液，并 检测其精液量。 5.2.3 剂量的计算 三支冻精的剂量平均数为样品的剂量，按式(1)计算： Q n1  n 2  n3 .................................... (1) 3 式中： Q—剂量值，单位为毫升； n1—第一支样品剂量，单位为毫升； n2—第二支样品剂量，单位为毫升； n3—第三支样品剂量，单位为毫升。 5.3 精子活力检查 5.3.1 主要器材 显微镜（带恒温装置）或电视显微装置、恒温水浴锅、5.0毫升试管、载玻片、盖玻片(18×18)、 滴管。 5.3.2 检查方法 三支细管分别直接置于37℃恒温水浴锅中水浴解冻，用滴管取解冻三支混合后精液约10微升置于载 玻片上加盖玻片，立即在载物台温度保持38℃的情况下用200倍或400倍显微镜观察活力，或通过电视显 微装置在荧光屏上观察活力。每样片观察3个视野，并应观察不同液层内的精子运动状态，进行全面评 定。 5.3.3 精子活力的计算 三个视野活力评价值的平均数按式(2)计算： M  式中： M—活力； n1—第一视野活力，单位为%； 2 n1  n 2  n3 .................................... (2) 3 DB63/T 1591—2017 n2—第二视野活力，单位为%； n3—第三视野活力，单位为%。 5.4 每剂量前进运动精子数检查 5.4.1 主要器材 血球计数板、血色素管、1毫升吸管、小试管、计数器、显微镜或电视显微装置、3.0%氯化钠溶液。 5.4.2 检查方法 用血色素管准确吸取10 微升解冻精液，注入盛有0.99毫升的3.0%氯化钠溶液的试管内，混匀，使 之成为100倍稀释的稀释精液。将备好的血球计数板用血盖片将计数室盖好，用血色素管吸取10微升稀 释精液于血盖片边缘，使精液自行流入计数室，均匀充满，不应有气泡，然后在显微镜下或电视荧光屏 上观察计数。每样品观察上下两个计数室，取平均值，如两个计数室计数结果误差超过5%，则应重检。 5.4.3 每剂量前进运动精子数计算 每剂量中精子数按式（3）计算： s  n  500  Q ..................................... (3) 式中： s—每剂量中精子数，单位为个； n—5个中方格精子数，单位为个； Q—细管剂量值,单位为毫升。 每剂量中前进运动精子数按式(4)计算： c  s  m ........................................ (4) 式中： c—每剂量中前进运动精子数，单位为个； s—每剂量中精子数，单位为个； m—活力，单位为%。 5.5 5.5.1 细菌数的检查 主要器材 培养箱、超净化工作台、三角烧瓶、高压蒸汽灭菌锅（或微波炉）、培养皿、恒温水浴锅、营养琼 脂培养基。 5.5.2 检查方法 营养琼脂培养基按产品说明配置于三角烧瓶中，经高压蒸汽灭菌锅灭菌30分钟后待用。 灭菌培养皿事先标号。细管冻精在恒温水浴锅中37℃水浴解冻，用酒精棉球消毒以无菌操作，一支 直接注于一个灭菌培养皿内；把已凉至50℃左右的营养琼脂以无菌操作倾倒入培养皿内，每皿约15 毫 升，并转动培养皿使精液混合均匀，同时做空白对照培养皿。待琼脂凝固后翻转培养皿，置培养箱内37 ℃恒温培养48小时取出，计数培养皿内菌落数。每只公獒样品取两支做两个培养皿，取平均值。 5.5.3 细菌数的计算 3 DB63/T 1591—2017 所检细管样品的细菌数按式(5)计算： B n1  n 2 ...................................... (5) 2 式中： B—细菌数，单位为个； n1—第一培养皿菌落数，单位为个； n2—第二培养皿菌落数，单位为个。 _________________________________ 4