ICS65.120 CCSB46T/ZNZ 浙江省农产品质量安全学会团体标准 T/ZNZ278—2024 饲料中氯霉素的快速检测 胶体金免疫层析法 Rapiddetectionofchloramphenicolresiduesinfeeds—Colloidalgold immunochromatographicmethod 2024-08-16发布 2024-09-16实施 浙江省农产品质量安全学会发布 全国团体标准信息平台 T/ZNZ278—2024 I前  言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由浙江省农产品质量安全学会提出并归口。 本文件起草单位：绿城农科检测技术有限公司、杭州谱育科技发展有限公司、杭州市临平区农业技 术推广中心、浙江方圆检测集团股份有限公司。 本文件主要起草人：徐冰洁、王馨瑜、曾雪梅、郑剑峰、胡陵、倪娟桢、王忠、王伟、桑力青、杨 晨璐、沈雄雅、俞璐萍、刘静、陶杨匀、赵月钧、王天琦。 全国团体标准信息平台 T/ZNZ278—2024 1饲料中氯霉素的快速检测胶体金免疫层析法 1范围 本文件规定了饲料中氯霉素胶体金免疫层析快速检测方法。 本文件适用于配合饲料、浓缩饲料及添加剂预混合饲料中氯霉素的快速筛查检测。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14699.1饲料采样 GB/T20195动物饲料试样的制备 农业部2483号公告-8-2016《饲料中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考的测定液相色谱-串联质谱法》 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4原理 本法采用竞争抑制免疫层析法，饲料中的氯霉素经乙酸乙酯提取，甲醇水净化后与胶体金标记的特 异性抗体结合，抑制抗体与试纸条检测线（T线）上人工抗原的结合，从而使控制线（C线）和检测线 （T线）颜色深浅发生变化。通过控制线（C线）和检测线（T线）颜色深浅比较，对样品进行定性判 定。 5试剂和材料 除特殊注明外，本法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的二级水。 5.1乙酸乙酯（C4H8O2）。 5.2氯霉素标准物质（C11H12Cl2N2O5）：CAS号56-75-7，分子量为323.129，纯度大于98%。 5.3氯霉素标准储备溶液：精确称取10mg氯霉素标准物质，用甲醇溶解，定容到100mL，配成100 μg/mL的标准储备溶液，于-20℃保存，有效期6个月。 5.4氯霉素标准工作溶液：移取适量标准储备溶液，用甲醇稀释成10ng/mL，于-20℃保存，有效期6 个月。 5.5氯霉素免疫胶体金快速检测试剂卡：密封包装，干燥阴凉处保存，使用前恢复至室温，即开即用。 全国团体标准信息平台 T/ZNZ278—2024 26仪器和设备 6.1电子天平：感量0.01g和0.1mg。 6.2涡旋混匀仪：转速≥2500r/min。 6.3离心机：转速≥8000r/min。 6.4氮气或空气吹干仪。 6.5微量移液器：100-1000μL，0.5-10mL。 7测定步骤 7.1试样制备 按GB/T14699.1的规定抽取具有代表性的样品，用四分法缩减取样，按照GB/T20195的规定制备样 品，粉碎过0.45mm孔径筛，混合均匀，装入磨口瓶中备用。 7.2提取 称取试样8.00g(±0.10g)于50mL离心管中，加入16mL乙酸乙酯，剧烈振荡1min，8000r/min离心 3min，吸取8mL上清液于10mL刻度管中，40℃水浴氮吹至近干，加入200μL甲醇：水（1:4）复溶， 待测。 7.3测定 取出氯霉素免疫胶体金快速检测试剂卡，恢复至室温，置于水平台面上。吸取7.2中待测液的下层 溶液120μL（8-10滴），加至氯霉素免疫胶体金快速检测试剂板的加样孔中，在8～40min内读取检测 结果。 7.4质控试验 7.4.1空白对照：每批样品需做一空白对照，按7.2、7.3进行。 7.4.2阴性对照：称取空白样品，按7.2、7.3进行。 7.4.3阳性对照：在空白样品加入一定量氯霉素标准溶液（其氯霉素含量≥检测下限），按7.2、7.3 进行。 8结果判断及表述 8.1试剂板有效性判定 8.1.1有效检测试剂板：空白对照控制线（C线）出现红色条带（如图1、图2），则检测试剂板有 效，可进行检测。 8.1.2失效检测试剂板：空白对照控制线（C线）不出现红色条带（如图3），则检测试剂板失效， 不能进行检测。 8.1.3 8.2目视结果 通过对比控制线（C线）和检测线（T线）的颜色深浅进行结果表示，目视结果示意图见图1、图 2、图3，结果有以下几种。 全国团体标准信息平台