ICS 65.020 B 16 中华人民共和国国家标准 GB/T 35342—2017 松材线虫分子检测鉴定技术规程 Technical regulation for molecular detection of Bursaphelenchus xylophilus (SteinerandBuhrer)Nickle 2017-12-29发布 2018-07-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T35342—2017 前言 本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草， 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC271)提出并归口。 本标准起草单位：南京林业大学、中国检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：叶建仁、吴小芹、陈凤毛、葛建军、黄麟、孙波。 GB/T35342—2017 引言 本文件的发布机构提请注意，声明符合本文件时，可能涉及5.1.2和5.3.2中有关松材线虫分子检 测引物的相关专利的使用。 本文件的发布机构对于该专利的真实性、有效性和范围无任何立场 该专利持有人已向本文件的发布机构保证，他愿意同任何申请人在合理且无歧视的条款和条件下， 就专利授权许可进行谈判。该专利持有人的声明已在本文件的发布机构备案。相关信息可以通过以下 联系方式获得： 专利持有人姓名：叶建仁 地址：南京市龙蟠路159号，南京林业大学（210037） 请注意除上述专利外，本文件的某些内容仍可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专 利的责任。 GB/T35342—2017 松材线虫分子检测鉴定技术规程 1范围 本标准规定了松材线虫分子检测鉴定的技术规程。 本标准适用于进出境植物检疫、国内植物检疫以及林业有害生物调查中松材线虫及其寄主植物和 制品携带松材线虫的分子检测鉴定工作。 2术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 松材线虫pinewood nematode[Bursaphelenchus xylophilus（SteineretBuhrer）Nickle] 一种无脊椎动物，属于线虫门（Nematoda）、侧尾腺纲（Secernentea）、滑刃目（Aphelenchida）滑刃 总科（Aphelenchoidoidea）、滑刃科（Aphelenchoididae），伞滑刃亚科（Bursaphelenchinae）、伞滑刃属 （Bursaphelenchus）的植物寄生线虫。 2.2 松材线虫病pine wilt disease caused by pine wood nematode 又名松树萎焉病，是由松材线虫寄生在松树体内所引起的一种松树毁灭性森林病害。 2.3 分子检测moleculardetection 以功能基因、核糖体ITS等区域为靶标，采用分子生物学的方法在基因水平上对物种进行鉴定。 2.4 寄主植物及其制品pinewoodandwoodproducts 松材线虫寄主植物及其原木、锯材和用于承载、包装、铺垫、支撑、加固货物的木质材料，如木板箱、 木条箱、木托盘、木框、木桶、木轴、木楔、垫木、枕木和衬木等。经人工合成或经加热、加压等深度加工的 包装木质材料，如胶合板、纤维板等除外。 2.5 引物primer 一段短核苷酸序列。其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点，在聚合反应时，引导合成一条与模板 互补的DNA的序列。 2.6 TaqMan探针TaqManprobe 发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'-3外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光 基团和灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧 光分子形成，荧光信号与扩增的拷贝数具有一一对应的关系。 2.7 循环阅值Cyclethresholdvalue 循环阈值（Ct值）的含义是指在PCR扩增过程中，荧光信号开始由本底进人指数增长阶段的拐点 1